LRP Particelle di Attivazione Lentivirale (m2): sc-429657-LAC-2

Il gene Mvp del topo codifica la major vault protein (MVP, nota anche come LRP), un componente strutturale principale delle particelle ribonucleoproteiche vault, coinvolte nel trasporto nucleo-citoplasmatico, nel trafficking intracellulare e nella regolazione della trasduzione del segnale. MVP partecipa alle risposte cellulari allo stress e modula vie tra cui la segnalazione PI3K–AKT e MAPK, influenzando proliferazione, apoptosi e risposte infiammatorie in modo dipendente dal contesto. Alterazioni dell’espressione di MVP sono state associate a fenotipi di resistenza multidrug e alla biologia tumorale, ed è inoltre studiata in relazione alla regolazione immunitaria e ai processi neuroinfiammatori. L’editing genetico di Mvp in modelli murini consente di chiarire i meccanismi di funzione delle particelle vault, di analizzare il crosstalk tra vie di segnalazione in condizioni di stress o di esposizione a xenobiotici e di svolgere studi di genomica funzionale che collegano MVP a fenotipi cellulari rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale LRP (m2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Mvp in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale LRP (m2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Mvp, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di LRP. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Mvp e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.