LONRF2 Plasmide Double Nickase (h): sc-414877-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LONRF2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LONRF2 Double Nickase Plasmid (h) e il LONRF2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LONRF2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LONRF2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-414877-NIC | 20 µg | $410.00 |
LONRF2 codifica una proteina contenente un dominio N‑terminale di tipo Lon peptidasi e un dominio RING finger, che si prevede agisca come ligasi E3 dell’ubiquitina, collegando il riconoscimento del substrato al turnover proteico dipendente dall’ubiquitina. Attraverso il suo dominio di tipo RING, LONRF2 è in grado di influenzare i percorsi della proteostasi che regolano la stabilità proteica, il controllo qualità e la segnalazione adattativa allo stress nelle cellule umane. La modulazione delle reti di ubiquitinazione può influire sulla progressione del ciclo cellulare, sulla segnalazione neuronale e immunitaria e sulle risposte allo stress proteotossico, rendendo LONRF2 un bersaglio utile per studi meccanicistici della regolazione delle vie di segnalazione. Un’alterata regolazione mediata dall’ubiquitina è ampiamente implicata nella biologia delle malattie umane, a supporto di ricerche su come LONRF2 influenzi fenotipi cellulari rilevanti per disturbi complessi.
LONRF2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LONRF2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LONRF2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LONRF2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LONRF2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.