LMX1A Plasmide Double Nickase (h): sc-418369-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LMX1A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LMX1A Double Nickase Plasmid (h) e il LMX1A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LMX1A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LMX1A Plasmide Double Nickase (h) | sc-418369-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LMX1A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-418369-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LMX1A codifica un fattore di trascrizione LIM-homeobox che agisce come regolatore determinante di linea cellulare durante lo sviluppo embrionale, con ruoli di rilievo nella specificazione dei neuroni dopaminergici del mesencefalo e nella differenziazione delle cellule pancreatiche. Legandosi al DNA tramite il suo omeodominio e coordinando le interazioni con cofattori attraverso i domini LIM, LMX1A modella programmi trascrizionali legati alla neurogenesi, all’impegno del destino cellulare e alla definizione dei pattern tissutali. Interagisce con reti di segnalazione dello sviluppo, come le vie Wnt e BMP, che coordinano gradienti morfogenetici e l’espressione genica a valle. Alterazioni dell’espressione di LMX1A o del suo controllo regolatorio sono state associate a fenotipi di neuro-sviluppo e sono state esplorate nel contesto della vulnerabilità dei neuroni dopaminergici, rilevante per la biologia della malattia di Parkinson.
LMX1A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LMX1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LMX1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LMX1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LMX1A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.