Laminin γ-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401029-ACT

LAMC1 codifica la laminina γ1, una catena essenziale di glicoproteina della matrice extracellulare che si assembla con le subunità α e β per formare molteplici isoforme di laminina nelle membrane basali. La laminina γ1 supporta l’adesione, la polarità e la migrazione cellulare interagendo con le integrine e altri recettori, coordinando segnali che influenzano l’organizzazione del citoscheletro, la sopravvivenza e i programmi di differenziamento. Attraverso il suo ruolo nell’integrità della membrana basale, LAMC1 contribuisce alla morfogenesi tissutale e alle interazioni epitelio–mesenchimali, processi frequentemente rimodellati nella fibrosi, nell’invasione tumorale e nella disfunzione vascolare. Reti di laminina deregolate e un’espressione alterata di LAMC1 sono state associate a un deposito anomalo di matrice extracellulare e a cambiamenti nella segnalazione cellula–matrice osservati in diverse patologie umane.

Laminin γ-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LAMC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Laminin γ-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LAMC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LAMC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Laminin γ-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LAMC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Laminin γ-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Laminin γ-1 nelle cellule tumorali con espressione di LAMC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.