Keap1 Plasmide Double Nickase (m): sc-424513-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Keap1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Keap1 Double Nickase Plasmid (m) e il Keap1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Keap1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Keap1 Antibody (F-10): sc-514914
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Keap1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-424513-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Keap1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-424513-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Keap1 (Kelch-like ECH-associated protein 1) è un adattatore citosolico di un complesso ligasi E3 dell’ubiquitina basato su CUL3 che si lega a NFE2L2/NRF2 e ne promuove l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale in condizioni basali. Lo stress ossidativo o elettrofilo modifica residui chiave di cisteina in KEAP1, indebolendo la repressione di NRF2 e consentendo la trascrizione di geni antiossidanti, di detossificazione e metabolici attraverso il programma ARE. Questo asse KEAP1–NRF2 coordina l’omeostasi redox, il metabolismo del glutatione e le vie di risposta agli xenobiotici nelle cellule murine, influenzando infiammazione, funzione mitocondriale e proteostasi. Un’attività disregolata di Keap1 è ampiamente utilizzata come leva meccanicistica nei modelli di biologia dello stress ossidativo e di condizioni caratterizzate da una segnalazione redox alterata.
Keap1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Keap1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Keap1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Keap1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Keap1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.