karyopherin α7 Plasmide di attivazione CRISPR (h2): sc-418827-ACT-2

Il gene umano KPNA7 codifica la karioferina alfa 7, un adattatore della famiglia delle importine-α che riconosce i segnali di localizzazione nucleare classici e collabora con l’importina-β per mediare un trasporto nucleocitoplasmatico selettivo attraverso il complesso del poro nucleare. KPNA7 favorisce l’importazione nel nucleo di proteine regolatorie coinvolte nel controllo trascrizionale, nella progressione del ciclo cellulare e nei programmi di sviluppo precoce, collegandosi così a vie più ampie di trasporto nucleare e a processi associati alla cromatina. Una segnalazione delle importine-α deregolata e un’alterata espressione di KPNA7 sono state riportate in contesti di proliferazione aberrante e biologia tumorale, suggerendo una rilevanza per i meccanismi di localizzazione nucleare dei fattori di trascrizione oncogenici e di regolazione del genoma. I reagenti per KPNA7 sono utili per analizzare la specificità dei carichi, mappare le reti di importazione nucleare e valutare come perturbazioni del traffico nucleare influenzino l’espressione genica e i fenotipi cellulari in sistemi modello umani.

karyopherin α7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KPNA7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

karyopherin α7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KPNA7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KPNA7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di karyopherin α7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KPNA7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da karyopherin α7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via karyopherin α7 nelle cellule tumorali con espressione di KPNA7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.