JunB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400493-ACT

JUNB codifica JunB, un fattore di trascrizione della famiglia AP-1 che risponde rapidamente a stimoli mitogenici e di stress per regolare programmi di espressione genica che controllano proliferazione, differenziamento e apoptosi. JunB integra segnali provenienti dalle vie MAPK/ERK e JNK e coopera con le proteine Fos per modulare l’attività di enhancer e promotori in diversi contesti di cellule immunitarie e stromali. Nella biologia umana, un’attività alterata di JUNB è stata associata a una segnalazione infiammatoria deregolata, a un differenziamento ematopoietico aberrante e a reti trascrizionali oncogeniche, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale dipendente dal contesto. JUNB è anche spesso utilizzato come readout e regolatore nelle risposte guidate dalle citochine, nelle transizioni del ciclo cellulare e nel rimodellamento dello stato della cromatina.

JunB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di JUNB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

JunB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus JUNB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione JUNB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di JunB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus JUNB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da JunB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via JunB nelle cellule tumorali con espressione di JUNB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.