JMJD3 Plasmide Double Nickase (m): sc-432132-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- JMJD3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il JMJD3 Double Nickase Plasmid (m) e il JMJD3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Kdm6b. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
JMJD3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-432132-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
JMJD3 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-432132-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Kdm6b** codifica **JMJD3 (KDM6B)**, una demetilasi istonica contenente il dominio **Jumonji C** che rimuove i segni repressivi **H3K27me3** per promuovere l’attivazione trascrizionale. JMJD3 coordina il rimodellamento della cromatina durante l’impegno di linea e la segnalazione infiammatoria, influenzando programmi a valle di vie quali **NF-κB** e reti trascrizionali dello sviluppo. Regolando l’accessibilità di enhancer e promotori, contribuisce alla polarizzazione dei macrofagi, alla differenziazione neurale e scheletrica e all’espressione genica associata alla senescenza cellulare. Un’attività disregolata di Kdm6b/JMJD3 è stata associata a stati epigenetici alterati osservati nella biologia dei tumori, nei processi di neurosviluppo e in modelli di malattie immuno-mediate.
JMJD3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Kdm6b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Kdm6b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Kdm6b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Kdm6b interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.