Plásmido CRISPR de Activación (h) Jade-1: sc-410620-ACT

JADE1 codifica Jade-1, una proteína nuclear con dedo de zinc tipo PHD que funciona como regulador epigenético al reconocer marcas de histonas y asociarse con complejos de acetiltransferasas de histonas para modular la accesibilidad de la cromatina y la transcripción. A través de estas interacciones, Jade-1 influye en programas vinculados al control del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la expresión génica asociada a la diferenciación. JADE1 también se ha estudiado en relación con la regulación dependiente de ubiquitina de proteínas de señalización y factores de transcripción, conectando el remodelado de la cromatina con la proteostasis. La expresión alterada de JADE1 o la desregulación de las vías de cromatina asociadas a Jade-1 se ha implicado en contextos de proliferación aberrante y reprogramación transcripcional asociada a tumores, lo que respalda su utilidad como un nodo mecanístico para investigaciones centradas en vías.

Jade-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de JADE1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Jade-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus JADE1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional JADE1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Jade-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo JADE1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Jade-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Jade-1 en células tumorales con expresión de JADE1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.