Jade-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410620-ACT

JADE1 codifica Jade-1, una proteina nucleare con dita di zinco PHD che agisce da regolatore epigenetico riconoscendo specifici segni istonici e associandosi a complessi con attività istone acetiltransferasica per modulare l’accessibilità della cromatina e la trascrizione. Attraverso queste interazioni, Jade-1 influenza programmi legati al controllo del ciclo cellulare, alle risposte al danno al DNA e all’espressione genica associata alla differenziazione. JADE1 è stato inoltre studiato in relazione alla regolazione ubiquitina-dipendente di proteine di segnalazione e fattori di trascrizione, collegando il rimodellamento della cromatina alla proteostasi. Un’alterata espressione di JADE1 o la disregolazione delle vie della cromatina associate a Jade-1 è stata implicata in contesti di proliferazione aberrante e di riprogrammazione trascrizionale associata ai tumori, a supporto della sua utilità come nodo meccanicistico per ricerche mirate ai pathway.

Jade-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di JADE1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Jade-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus JADE1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione JADE1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Jade-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus JADE1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Jade-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Jade-1 nelle cellule tumorali con espressione di JADE1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.