IRF-4 Plasmide Double Nickase (h): sc-400288-NIC

IRF4 codifica il fattore regolatorio dell’interferone 4 (IRF-4), un fattore di trascrizione a espressione prevalentemente linfoide che integra segnali provenienti dal recettore dell’antigene, dalle citochine e dall’immunità innata per controllare programmi genici nelle cellule B, nelle cellule T e durante la differenziazione delle plasmacellule. IRF-4 agisce in concerto con partner quali PU.1/SPI1, BATF e NF-κB per modulare l’accessibilità della cromatina e gli esiti trascrizionali che influenzano l’attivazione, la ricombinazione di switch di classe e le decisioni sul destino effettrice. Regola reti di segnalazione e trascrizionali a valle di vie che includono la segnalazione TCR/BCR, le risposte associate all’interferone e stati di attivazione collegati ai recettori Toll-like. Un’espressione o un’attività deregolata di IRF4 è implicata in disfunzioni immunomediate ed è frequentemente studiata nella biologia delle neoplasie ematologiche, in cui risultano alterati i programmi di identità di linea e di sopravvivenza cellulare.

IRF-4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IRF4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IRF4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IRF4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IRF4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.