IP3R-I Plasmide Double Nickase (h): sc-400986-NIC

ITPR1 codifica il recettore dell’inositolo 1,4,5-trifosfato di tipo 1 (IP3R-I), un canale intracellulare di rilascio di Ca²⁺ localizzato principalmente nel reticolo endoplasmatico, che collega l’IP3 generato dalla fosfolipasi C a rapidi transitori di calcio citosolico. Attraverso una mobilizzazione regolata del Ca²⁺, IP3R-I modella l’accoppiamento eccitazione–trascrizione, la bioenergetica mitocondriale, l’autofagia e la segnalazione di chinasi/fosfatasi Ca²⁺-dipendenti, incluse le vie CaMK e calcineurina–NFAT. Nelle cellule umane, l’attività di ITPR1 integra segnali provenienti da GPCR e recettori tirosin-chinasici per controllare secrezione, contrattilità e la dinamica della segnalazione neuronale. Alterazioni della segnalazione di IP3R-I e varianti di ITPR1 sono associate a disfunzioni neurologiche e a disturbi più ampi dell’omeostasi del Ca²⁺, rendendo questo locus un bersaglio frequente per studi meccanicistici sulle vie del calcio intracellulare.

IP3R-I Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITPR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITPR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITPR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITPR1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.