Plásmido Doble Nickase (h) IP3R-I: sc-400986-NIC

ITPR1 codifica el receptor de inositol 1,4,5-trisfosfato tipo 1 (IP3R-I), un canal intracelular de liberación de Ca²⁺ localizado principalmente en el retículo endoplásmico que acopla el IP3 generado por la fosfolipasa C con transitorios rápidos de calcio citosólico. Mediante una movilización regulada de Ca²⁺, IP3R-I modula el acoplamiento excitación–transcripción, la bioenergética mitocondrial, la autofagia y la señalización de quinasas/fosfatasas dependientes de Ca²⁺, incluidas las vías de CaMK y calcineurina–NFAT. En células humanas, la actividad de ITPR1 integra señales de GPCR y de receptores tirosina cinasa para controlar la secreción, la contractilidad y la dinámica de la señalización neuronal. Las alteraciones en la señalización de IP3R-I y las variaciones en ITPR1 se asocian con disfunción neurológica y con trastornos más amplios de la homeostasis del Ca²⁺, lo que convierte a este locus en un objetivo frecuente de estudios mecanísticos sobre las vías de calcio intracelular.

IP3R-I El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITPR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITPR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITPR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITPR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.