Plasmide Double Nickase (h) Integrin α7/ITGA7: sc-401678-NIC

ITGA7 code l’intégrine α7, une sous-unité α se liant à la laminine qui s’associe à β1 pour former un récepteur d’adhérence majeur dans le muscle squelettique et cardiaque. Cet hétérodimère relie les signaux de la matrice extracellulaire au cytosquelette d’actine via les réseaux d’adhérences focales et de signalisation des intégrines, coordonnant l’adhérence cellulaire, la migration, la mécanotransduction et la stabilité des fibres musculaires. La signalisation dépendante de l’intégrine α7 croise des voies régulant la dynamique du cytosquelette et la survie cellulaire, notamment FAK/SRC et la modulation en aval des axes MAPK/PI3K. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’ITGA7 ont été associées à des phénotypes liés aux dystrophies musculaires, à une régénération musculaire déficiente et à des changements des programmes d’adhérence et d’invasion des cellules tumorales, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la myogenèse et du remodelage de la matrice extracellulaire.

Integrin α7/ITGA7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGA7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGA7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGA7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGA7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.