IDH1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401159-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IDH1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IDH1 Double Nickase Plasmid (h) e il IDH1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira IDH1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IDH1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401159-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IDH1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401159-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’isocitrato deidrogenasi 1 (IDH1) è un enzima citosolico/perossisomiale NADP⁺-dipendente che catalizza la decarbossilazione ossidativa dell’isocitrato in α-chetoglutarato, generando NADPH a sostegno dell’omeostasi redox e del metabolismo biosintetico. Attraverso il controllo della disponibilità di α-chetoglutarato, IDH1 influenza la sintesi lipidica, la capacità antiossidante cellulare e l’attività delle diossigenasi α-chetoglutarato–dipendenti coinvolte nella regolazione epigenetica. Alterazioni della funzione di IDH1 sono associate a un riprogrammazione metabolica e a stati della cromatina alterati, incluse varianti neomorfiche ben caratterizzate che producono 2-idrossiglutarato e perturbano la demetilazione di DNA/istoni. Queste proprietà rendono IDH1 un nodo centrale per lo studio dell’accoppiamento metabolismo–epigenetica, delle risposte allo stress ossidativo e delle vulnerabilità specifiche di contesto nelle cellule umane.
IDH1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IDH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IDH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IDH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IDH1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.