HYPB Plasmide Double Nickase (h): sc-402789-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HYPB Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HYPB Double Nickase Plasmid (h) e il HYPB Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SETD2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HYPB Plasmide Double Nickase (h) | sc-402789-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HYPB Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402789-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SETD2 (HYPB) codifica una metiltransferasi istonica con dominio SET che catalizza la trimetilazione della lisina 36 dell’istone H3 (H3K36me3) durante l’allungamento trascrizionale, collegando lo stato della cromatina all’attività della RNA polimerasi II. Questo marcatore contribuisce a coordinare il processamento dell’RNA co-trascrizionale, le risposte allo stress da replicazione del DNA e la riparazione diretta dall’omologia, e favorisce il mantenimento dell’integrità genomica modulando l’accessibilità della cromatina. SETD2 metila anche substrati non istonici, tra cui l’α-tubulina e STAT1, collegandola alla regolazione del citoscheletro e ai programmi trascrizionali stimolati dall’interferone. La disregolazione o la perdita di H3K36me3 dipendente da SETD2 è associata ad alterazioni dei pattern di splicing, a un aumento dei tassi di mutazione e a instabilità epigenetica osservati in molteplici contesti rilevanti per il cancro, a supporto del suo frequente impiego in studi meccanicistici sulla cromatina e sulle vie di danno al DNA.
HYPB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SETD2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SETD2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SETD2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SETD2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.