HXK II Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400611-LAC

HK2 umano codifica l’esochinasi II (HXK II), l’enzima associato ai mitocondri che catalizza la fosforilazione del glucosio in glucosio-6-fosfato dipendente dall’ATP, impegnando il glucosio nella glicolisi e nelle successive vie anaboliche. Collegando l’utilizzo del glucosio al metabolismo mitocondriale, HXK II sostiene il flusso glicolitico, l’ingresso nella via dei pentoso fosfati e gli adattamenti metabolici durante l’ipossia tramite l’integrazione con la segnalazione di HIF-1 e con i programmi regolati da PI3K–AKT–mTOR. L’attività di HK2 è spesso associata alla riprogrammazione metabolica negli stati proliferativi, in cui l’aumento della glicolisi e un’alterata gestione del bilancio redox influenzano la sopravvivenza cellulare e la capacità biosintetica. Di conseguenza, HK2/HXK II è ampiamente utilizzato come nodo meccanicistico per studiare il sensing del glucosio, l’accoppiamento mitocondrio–metabolismo e fenotipi metabolici rilevanti per la malattia nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HXK II (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HK2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HXK II (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HK2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HXK II. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HK2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.