HSF2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402400-NIC

HSF2 (heat shock factor 2) è un fattore di trascrizione specifico per sequenza che coordina l’espressione genica in risposta allo stress e contribuisce alla proteostasi regolando le proteine da shock termico e le reti di chaperoni molecolari. Oltre alla segnalazione classica dello shock termico, HSF2 partecipa a programmi di sviluppo e differenziamento, inclusi quelli neuronali e della linea germinale, e interagisce con il rimodellamento della cromatina per plasmare output trascrizionali dipendenti dallo stimolo. L’attività di HSF2 può modulare la progressione del ciclo cellulare, la suscettibilità all’apoptosi e le risposte allo stress proteotossico, collegandola a vie rilevanti per la neurodegenerazione, la biologia del cancro e i disturbi caratterizzati da un’alterata omeostasi proteica. Programmi trascrizionali dipendenti da HSF2 deregolati sono stati riportati in molteplici contesti rilevanti per la malattia, sostenendone l’utilizzo come nodo meccanicistico per studiare l’adattamento allo stress e la regolazione trascrizionale nelle cellule umane.

HSF2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSF2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSF2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSF2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSF2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.