HIF PHD3 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-431083-LAC

Egln3 codifica la prolil idrossilasi 3 del fattore inducibile dall’ipossia (HIF PHD3), una diossigenasi sensibile all’ossigeno che idrossila le subunità HIF-α per favorire, in condizioni di normossia, l’ubiquitinazione dipendente da VHL e la degradazione proteasomiale. Attraverso la regolazione dei programmi trascrizionali di HIF, HIF PHD3 contribuisce a coordinare risposte cellulari che coinvolgono la segnalazione angiogenica, il metabolismo glicolitico, la funzione mitocondriale, l’equilibrio redox e l’adattamento a microambienti a bassa disponibilità di ossigeno. Nei sistemi murini, l’alterazione dell’attività di Egln3 è ampiamente utilizzata per studiare le dinamiche della via dell’ipossia durante lo sviluppo e il rimodellamento tissutale, in cui la disponibilità di ossigeno influenza il destino cellulare e le risposte allo stress. La deregolazione della segnalazione HIF–PHD è spesso impiegata come cornice meccanicistica in modelli di ischemia, infiammazione, fibrosi e biologia tumorale, confermando Egln3 come nodo chiave per ricerche focalizzate su questa via.

Le particelle di attivazione lentivirale HIF PHD3 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Egln3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HIF PHD3 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Egln3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HIF PHD3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Egln3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.