HGK Plasmide Double Nickase (m): sc-424141-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HGK Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HGK Double Nickase Plasmid (m) e il HGK Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Map4k4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HGK Plasmide Double Nickase (m) | sc-424141-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HGK Plasmide Double Nickase (m2) | sc-424141-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Map4k4 codifica per la chinasi serina/treonina HGK (MAP4K4), un regolatore a monte della segnalazione MAPK che collega segnali extracellulari all’attivazione delle vie JNK e p38 e ai programmi trascrizionali a valle. Nelle cellule murine, HGK integra segnali provenienti da citochine e stress cellulare per modulare il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione e le risposte infiammatorie, e può influenzare l’apoptosi e l’omeostasi metabolica attraverso il cross-talk tra reti di chinasi. Studi genetici e funzionali associano Map4k4 a processi rilevanti per la sensibilità all’insulina, la biologia del tessuto adiposo e del muscolo, la funzione endoteliale e l’attivazione delle cellule immunitarie, rendendolo un nodo utile per analizzare gerarchie di segnalazione guidate da chinasi. Un’attività alterata di MAP4K4 è stata implicata in meccanismi alla base di fenotipi di malattie cardiometaboliche e infiammatorie in modelli sperimentali, a supporto della sua ampia rilevanza nella ricerca incentrata sulle vie di segnalazione.
HGK Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Map4k4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Map4k4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Map4k4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Map4k4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.