HELIC2 Plasmide Double Nickase (m): sc-435793-NIC

Snrnp200 codifica la proteina murina HELIC2, un’elicasi dell’RNA essenziale della famiglia DExD/H-box all’interno della piccola ribonucleoproteina nucleare U5, che supporta l’attivazione dello spliceosoma e le fasi catalitiche dello splicing del pre-mRNA. Rimodellando le interazioni RNA–proteina durante il riconoscimento dei siti di splicing e la ligazione degli esoni, HELIC2 contribuisce a mantenere la fedeltà del trascrittoma, collegando la dinamica dello splicing a processi più ampi di maturazione dell’RNA e al controllo dell’espressione genica. L’alterazione delle elicasi spliceosomali core può indurre cambiamenti diffusi nello splicing alternativo e risposte di stress cellulare, rendendo Snrnp200 un utile punto di partenza per studiare il metabolismo dell’RNA e le relazioni genotipo-fenotipo nei sistemi mammiferi. L’analisi funzionale di HELIC2 è inoltre rilevante per modellare i meccanismi attraverso cui la perturbazione dello spliceosoma contribuisce, in contesti sperimentali, a errori di splicing associati a malattia e ad alterazioni della proteostasi.

HELIC2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Snrnp200 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Snrnp200. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Snrnp200. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Snrnp200 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.