GULP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406041-ACT

Il gene umano **GULP1** codifica **GULP**, una proteina adattatrice che collega il riconoscimento delle cellule apoptotiche dipendente dalla fosfatidilserina ai macchinari intracellulari di inglobamento durante l’efferocitosi. Attraverso interazioni con recettori quali **LRP1/MEGF10** e mediante il rimodellamento del citoscheletro a valle, GULP coordina vie di segnalazione che controllano la formazione della coppa fagocitica, il traffico vescicolare e la rimozione dei detriti cellulari. Questi processi contribuiscono all’omeostasi tissutale e alla risoluzione dell’infiammazione, e un’alterata regolazione della rimozione delle cellule apoptotiche è stata associata, in sistemi sperimentali, a stati infiammatori cronici e a fenotipi neurodegenerativi. Di conseguenza, **GULP1** è ampiamente studiato in contesti che coinvolgono la funzione delle cellule immunitarie, la biologia della microglia e l’endocitosi mediata da recettori.

GULP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GULP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GULP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GULP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GULP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GULP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GULP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GULP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GULP nelle cellule tumorali con espressione di GULP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.