gremlin-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403982-ACT

Il gene umano **GREM2** codifica **gremlin-2**, una glicoproteina secreta con motivo “cystine-knot” che funziona come antagonista extracellulare delle proteine morfogenetiche dell’osso (**BMP**), incluse **BMP2** e **BMP4**. Sequestrando i ligandi BMP, gremlin-2 modula programmi trascrizionali dipendenti da **SMAD** che influenzano le decisioni di destino cellulare, la differenziazione e il patterning tissutale, interfacciandosi anche con la più ampia segnalazione della superfamiglia **TGF-β**. L’attività di GREM2 è quindi rilevante per studi di biologia dello sviluppo, rimodellamento associato alla fibrosi e regolazione di processi osteogenici e neurovascolari. In letteratura, un antagonismo delle BMP deregolato è stato collegato a cambiamenti associati a malattia nella dinamica della matrice extracellulare e a stati di differenziazione aberranti, rendendo GREM2 un bersaglio utile per l’interrogazione meccanicistica delle vie di segnalazione.

gremlin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GREM2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

gremlin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GREM2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GREM2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di gremlin-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GREM2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da gremlin-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via gremlin-2 nelle cellule tumorali con espressione di GREM2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.