GPR35 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-425672-LAC

Il gene murino **Gpr35** codifica **GPR35**, un recettore accoppiato a proteine G simile alla rodopsina, implicato nel riconoscimento di ligandi a piccole molecole e nella modulazione delle risposte di segnalazione intracellulare che influenzano i flussi di calcio, la dinamica del cAMP e i programmi trascrizionali a valle. L’attività di GPR35 è stata associata alla regolazione della chemiotassi e dell’attivazione delle cellule immunitarie, delle risposte della barriera epiteliale e, più in generale, di reti di segnalazione infiammatoria, incluse vie che convergono sull’espressione genica dipendente da MAPK e NF-κB. Per GPR35 sono stati riportati espressione e associazioni genetiche in tessuti rilevanti per l’immunità mucosale e l’omeostasi metabolica, il che ha motivato studi in modelli di infiammazione intestinale, segnalazione del dolore e fenotipi cardiometabolici. In quanto GPCR conservato con accoppiamento dipendente dal contesto, GPR35 rappresenta un nodo sperimentalmente accessibile per analizzare programmi di regolazione genica guidati dal recettore in cellule primarie e in sistemi murini rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale GPR35 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Gpr35 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GPR35 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Gpr35, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GPR35. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Gpr35 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.