GPR105 Plasmide Double Nickase (m): sc-431244-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR105 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR105 Double Nickase Plasmid (m) e il GPR105 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira P2ry14. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR105 Plasmide Double Nickase (m) | sc-431244-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR105 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-431244-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **P2ry14** codifica il recettore accoppiato a proteine G **GPR105 (P2Y14)**, un recettore per zuccheri nucleotidici attivato da UDP-zuccheri come l’UDP-glucosio e accoppiato principalmente alla segnalazione **Gi**. L’attivazione di GPR105 può modulare i livelli di **cAMP** e influenzare vie a valle che regolano chemiotassi, produzione di citochine e attivazione dell’immunità innata, con ruoli riportati nella funzione delle cellule mieloidi e nell’infiammazione associata alle barriere. Nei sistemi murini, l’attività di P2ry14 è stata collegata a risposte infiammatorie e alla segnalazione di stress metabolico, rendendolo rilevante per studi sull’infiammazione delle vie aeree e dell’intestino, sull’immunometabolismo del tessuto adiposo e su processi neuroinfiammatori associati alla microglia. In quanto GPCR situato all’interfaccia tra metabolismo extracellulare dei nucleotidi e segnalazione immunitaria, P2ry14 è spesso utilizzato per indagare la regolazione purinergica dell’omeostasi tissutale e di circuiti infiammatori rilevanti per la malattia.
GPR105 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus P2ry14 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di P2ry14. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di P2ry14. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con P2ry14 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.