gp91phox Plasmide Double Nickase (m): sc-419890-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- gp91phox Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il gp91phox Double Nickase Plasmid (m) e il gp91phox Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cybb. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
gp91phox Plasmide Double Nickase (m) | sc-419890-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
gp91phox Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419890-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Cybb** codifica **gp91phox (NOX2)**, la subunità catalitica di membrana del complesso **NADPH ossidasi** dei fagociti, che trasferisce elettroni dal NADPH all’ossigeno molecolare per generare **anione superossido** e, a valle, **specie reattive dell’ossigeno (ROS)**. Questo burst ossidativo sostiene la difesa antimicrobica, la segnalazione dipendente dallo stato redox e la regolazione delle risposte infiammatorie attraverso vie che influenzano la maturazione del fagosoma e la produzione di citochine. L’attività di gp91phox richiede l’assemblaggio con **p22phox** e con fattori citosolici quali **p47phox**, **p67phox** e le **GTPasi Rac** sulle membrane cellulari. L’alterazione della produzione di ROS dipendente da Cybb è ampiamente utilizzata per modellare funzioni immunitarie innate modificate e meccanismi di stress ossidativo rilevanti per fenotipi di immunodeficienza e infiammazione nei sistemi murini.
gp91phox Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cybb nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cybb. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cybb. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cybb interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.