Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
GM130 Plasmide Double Nickase (h): sc-400787-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GM130 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GM130 Double Nickase Plasmid (h) e il GM130 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GOLGA2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GM130 Antibody (H-7): sc-55590
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GM130 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GM130 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GOLGA2 codifica la proteina della matrice del cis-Golgi GM130, un’impalcatura centrale per l’organizzazione del nastro del Golgi e per l’ancoraggio delle vescicole, che sostiene un trasporto efficiente dal RE al Golgi e l’impilamento delle cisterne. GM130 coordina fattori di tethering e reti di traffico regolate da piccole GTPasi per mantenere l’architettura del Golgi durante l’interfase e promuoverne il riassemblaggio dopo la mitosi, influenzando la secrezione polarizzata e il posizionamento degli organelli. Attraverso i suoi ruoli nel traffico di membrana, nella maturazione delle proteine e nelle dinamiche del Golgi legate al ciclo cellulare, un’alterata funzione di GM130 è rilevante per le risposte allo stress cellulare, i fenotipi di migrazione e le perturbazioni della struttura del Golgi associate a malattie riportate in molteplici contesti biologici.
GM130 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GOLGA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GOLGA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GOLGA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GOLGA2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.