galectin-9 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421420-ACT

Il gene murino Lgals9 codifica per la galectina-9, una lectina legante i β-galattosidi che regola le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice attraverso il riconoscimento, dipendente dai glicani, di glicoconiugati presenti sulla superficie cellulare e nella matrice extracellulare. La galectina-9 contribuisce alla segnalazione immunitaria e alla regolazione dell’infiammazione modulando l’attivazione dei leucociti, i programmi citochinici e il traffico tissutale, con effetti a valle su vie collegate alla biologia dei checkpoint immunitari e alla trascrizione responsiva allo stress. Influenza inoltre adesione, migrazione e apoptosi, processi che modellano le dinamiche tumore–sistema immunitario e i microambienti infiammatori cronici. Un’espressione deregolata di LGALS9/galectina-9 è stata associata ad autoimmunità, immunopatologia delle malattie infettive e biologia del cancro, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico negli studi di immunologia e del microambiente.

galectin-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Lgals9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

galectin-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Lgals9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Lgals9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di galectin-9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Lgals9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da galectin-9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via galectin-9 nelle cellule tumorali con espressione di Lgals9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.