galectin-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405948-ACT

Il gene umano **LGALS2** codifica la **galectina-2**, una lectina legante i **β-galattosidi** che modula le interazioni **cellula–cellula** e **cellula–matrice** riconoscendo specifici motivi glicani su proteine di membrana ed extracellulari. La galectina-2 è implicata nella regolazione dell’attività delle cellule immunitarie e della segnalazione infiammatoria, influenzando processi quali l’adesione dei leucociti, le risposte della barriera epiteliale e le reti guidate dalle citochine. Attraverso il legame lectina–glicano, può interferire con vie associate ad apoptosi, attivazione dell’immunità innata e omeostasi tissutale. Un’espressione alterata di **LGALS2** è stata associata a fenotipi legati all’infiammazione e al sistema cardiovascolare, a sostegno della sua rilevanza come bersaglio meccanicistico negli studi di biologia delle malattie.

galectin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LGALS2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

galectin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LGALS2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LGALS2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di galectin-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LGALS2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da galectin-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via galectin-2 nelle cellule tumorali con espressione di LGALS2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.