FSHR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400899-ACT

FSHR (recettore dell’ormone follicolo-stimolante) è un recettore umano per ormoni glicoproteici che si accoppia principalmente alle proteine Gs per stimolare la segnalazione cAMP/PKA dopo il legame con il ligando, plasmando programmi trascrizionali che controllano la differenziazione delle cellule gonadiche, la steroidogenesi e la follicologenesi. L’attivazione del recettore si integra con processi regolatori più ampi tipici dei GPCR, tra cui desensibilizzazione e internalizzazione del recettore e la dinamica della segnalazione MAPK a valle, che influenzano proliferazione e responsività endocrina. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di FSHR sono associate a fenotipi endocrini riproduttivi quali disfunzione ovarica, sensibilità variabile alle gonadotropine e fertilità compromessa, ed FSHR è anche utilizzato come marcatore di stati cellulari ormono-responsivi. Poiché FSHR collega segnali extracellulari delle gonadotropine a vie intracellulari di secondi messaggeri, rappresenta un nodo utile per analizzare la regolazione endocrina e le transizioni di stato cellulare nei modelli di biologia riproduttiva.

FSHR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FSHR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FSHR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FSHR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FSHR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FSHR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FSHR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FSHR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FSHR nelle cellule tumorali con espressione di FSHR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.