Frataxin Plasmide Double Nickase (h): sc-401628-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Frataxin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Frataxin Double Nickase Plasmid (h) e il Frataxin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FXN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Frataxin Antibody (G-12): sc-518079
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Frataxin Plasmide Double Nickase (h) | sc-401628-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Frataxin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401628-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FXN umano codifica la frataxina, una proteina della matrice mitocondriale necessaria per la biogenesi dei cluster ferro–zolfo (Fe–S) e per la regolazione della gestione del ferro a livello mitocondriale. La frataxina supporta il macchinario di assemblaggio ISC, mantenendo l’attività degli enzimi dipendenti dai Fe–S coinvolti nella fosforilazione ossidativa, nella funzione dell’aconitasi e nell’omeostasi redox cellulare. Una ridotta funzione di FXN è associata a disfunzione mitocondriale, stress ossidativo e alterazioni del metabolismo energetico, rendendolo un nodo chiave nelle vie che governano il controllo di qualità mitocondriale e il metabolismo del ferro. FXN è ampiamente studiato in modelli di neurodegenerazione e di stress cardiometabolico per collegare la bioenergetica mitocondriale alle specie reattive dell’ossigeno guidate dal ferro.
Frataxin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FXN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FXN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FXN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FXN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.