FAS Plasmide Double Nickase (m): sc-420287-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FAS Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FAS Double Nickase Plasmid (m) e il FAS Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Fas. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FAS Antibody (C236): sc-21730
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FAS Plasmide Double Nickase (m) | sc-420287-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FAS Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420287-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Fas codifica per il recettore di morte FAS (CD95/TNFRSF6), un iniziatore chiave dell’apoptosi estrinseca in seguito al legame con il ligando FAS e all’assemblaggio del complesso di segnalazione che induce la morte (DISC). L’attivazione del recettore recluta FADD e promuove l’attivazione della caspasi-8, collegandosi alle caspasi effettrici a valle e, in alcuni contesti, all’amplificazione mitocondriale tramite il clivaggio di BID. Oltre all’apoptosi, la segnalazione di FAS può intersecarsi con le vie di NF-κB e MAPK, influenzando l’omeostasi immunitaria, la tolleranza periferica e l’infiammazione. Un’attività di FAS deregolata è implicata in una difettosa eliminazione dei linfociti, in fenotipi autoimmuni e in una suscettibilità alterata all’elusione immunitaria da parte dei tumori, rendendo Fas del topo un nodo ampiamente utilizzato per studi meccanicistici in immunologia e nella morte cellulare.
FAS Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Fas nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Fas. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Fas. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Fas interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.