Plásmido CRISPR de Activación (h) FAF1: sc-405535-ACT

FAF1 (factor asociado a Fas 1) codifica una proteína adaptadora citoplasmática que acopla la señalización de receptores de muerte con vías apoptóticas y de proteostasis aguas abajo. FAF1 interactúa con FAS y con reguladores de caspasas, y también modula la señalización de NF-κB, influyendo en la supervivencia celular, en programas transcripcionales inflamatorios y en respuestas al estrés. A través de asociaciones descritas con componentes del sistema ubiquitina–proteasoma, FAF1 contribuye al control de calidad proteico y puede moldear la sensibilidad celular a la apoptosis extrínseca. La desregulación de la expresión o la función de FAF1 se ha vinculado en la literatura con la biología del cáncer, procesos neurodegenerativos y fenotipos relacionados con el sistema inmunitario, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de decisiones del destino celular.

FAF1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FAF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FAF1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FAF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FAF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FAF1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FAF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FAF1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FAF1 en células tumorales con expresión de FAF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.