FA2H Plasmide Double Nickase (m): sc-436124-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FA2H Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FA2H Double Nickase Plasmid (m) e il FA2H Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Fa2h. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FA2H Plasmide Double Nickase (m) | sc-436124-NIC | 20 µg | $410.00 |
Fa2h codifica la fatty acid 2-hydroxylase (FA2H), un enzima associato al reticolo endoplasmatico che catalizza la 2-idrossilazione degli acidi grassi a catena lunga, un passaggio chiave per la produzione di sfingolipidi 2-idrossilati e galattosilceramidi. Questi lipidi contribuiscono all’organizzazione delle membrane e alla stabilità della mielina, collegando l’attività di FA2H al metabolismo degli sfingolipidi, alla biologia degli oligodendrociti e alle interazioni tra assone e glia. Alterazioni della funzione di FA2H sono state associate a squilibri nella composizione lipidica della mielina e a fenotipi neurodegenerativi, rendendola rilevante per lo studio dell’omeostasi lipidica nel sistema nervoso. Nei modelli murini, la perturbazione di Fa2h viene comunemente sfruttata per indagare i meccanismi della mielinizzazione, la dinamica delle membrane e le risposte di stress cellulare dipendenti dai lipidi.
FA2H Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Fa2h nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Fa2h. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Fa2h. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Fa2h interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.