Exo1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402356-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Exo1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Exo1 Double Nickase Plasmid (h) e il Exo1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EXO1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Exo1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402356-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Exo1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402356-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EXO1 codifica Exo1, un’esonucleasi 5′→3′ specifica per la struttura che partecipa alla resezione delle estremità del DNA durante la ricombinazione omologa e al processamento delle forcelle di replicazione bloccate. Contribuisce inoltre alla riparazione degli appaiamenti errati (mismatch repair) coordinandosi con i componenti della via MutS/MutL per escidere il DNA mal appaiato, mantenendo così la stabilità del genoma. Attraverso queste attività, EXO1 influenza la segnalazione dei checkpoint del ciclo cellulare, le risposte allo stress replicativo e la risoluzione degli intermedi di ricombinazione. Alterazioni della funzione o dell’espressione di EXO1 sono state associate a fenotipi mutatori e a instabilità genomica osservati in molteplici contesti legati al cancro, a sostegno della sua utilità come nodo meccanicistico nella ricerca sulla riparazione del DNA.
Exo1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EXO1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EXO1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EXO1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EXO1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.