Ets-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423870-ACT

Ets1 codifica il fattore di trascrizione Ets-1 della famiglia ETS, un regolatore chiave dei programmi di espressione genica che determinano differenziamento, proliferazione e sopravvivenza cellulare. Nelle cellule di topo, Ets-1 integra segnali provenienti da MAPK/ERK e da cascate chinasiche correlate per modulare l’attività di enhancer e promotori che controllano le risposte alle citochine, il rimodellamento della matrice extracellulare e le reti trascrizionali specifiche di linea cellulare. Ets-1 è ampiamente studiato in immunologia per i suoi ruoli nello sviluppo e nell’attivazione di cellule T e B, e anche in contesti vascolari e stromali, dove influenza fenotipi angiogenici e migratori. Un’attività deregolata di ETS1 è stata associata a fenotipi infiammatori e autoimmuni e a riprogrammazione trascrizionale oncogena, rendendolo un nodo utile per l’analisi di vie di segnalazione e reti geniche.

Ets-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ets1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ets-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ets1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ets1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ets-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ets1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ets-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ets-1 nelle cellule tumorali con espressione di Ets1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.