eRF3a Plasmide Double Nickase (h): sc-404748-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eRF3a Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eRF3a Double Nickase Plasmid (h) e il eRF3a Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GSPT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eRF3a Plasmide Double Nickase (h) | sc-404748-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eRF3a Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404748-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **GSPT1** codifica **eRF3a**, un fattore di terminazione della traduzione che forma un complesso funzionale con **eRF1** per promuovere il rilascio del peptide dipendente da GTP ai codoni di stop e coordinare il riciclo del ribosoma. Oltre alla terminazione, eRF3a partecipa a vie di sorveglianza dell’mRNA come la degradazione dell’mRNA mediata da codoni nonsenso (nonsense-mediated mRNA decay, NMD) e influenza la proteostasi collegando le dinamiche della traduzione al controllo qualità delle proteine. L’attività di GSPT1 è integrata con la regolazione del ciclo cellulare e con programmi traduzionali responsivi allo stress, e un’espressione alterata è stata associata a fenotipi proliferativi in molteplici contesti rilevanti per il cancro. In quanto nodo centrale della fedeltà traduzionale e del turnover dell’mRNA, eRF3a è spesso studiata per indagare i meccanismi di riconoscimento dei codoni di stop, la stabilità dei trascritti e il controllo della crescita.
eRF3a Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GSPT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GSPT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GSPT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GSPT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.