ErbB2/HER2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420218-ACT

Il gene murino **Erbb2** codifica la tirosin-chinasi recettoriale **ErbB2/HER2**, un membro della famiglia **EGFR/ErbB** che funge da partner preferenziale di eterodimerizzazione per amplificare la segnalazione dei fattori di crescita. Una volta attivato, ErbB2 coinvolge le vie **MAPK/ERK** e **PI3K–AKT** per regolare proliferazione, sopravvivenza, metabolismo e differenziamento, con effetti aggiuntivi su adesione e motilità cellulare. Nell’epitelio mammario e in altri tessuti, la segnalazione di ErbB2 contribuisce al patterning dello sviluppo e all’omeostasi tissutale, e la sua deregolazione è ampiamente utilizzata come modello di segnalazione oncogenica e di alterato traffico recettoriale. Poiché ErbB2 è privo di un ligando solubile noto, la sua attività viene spesso studiata attraverso variazioni dei livelli di espressione, della composizione dei dimeri e delle reti di fosforilazione a valle.

ErbB2/HER2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Erbb2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ErbB2/HER2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Erbb2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Erbb2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ErbB2/HER2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Erbb2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ErbB2/HER2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ErbB2/HER2 nelle cellule tumorali con espressione di Erbb2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.