ER71 Plasmide Double Nickase (h): sc-404462-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ER71 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ER71 Double Nickase Plasmid (h) e il ER71 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ETV2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ER71 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404462-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ER71 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404462-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ETV2 umano codifica il fattore di trascrizione ETS ER71, un regolatore chiave della specificazione delle linee vascolare ed ematopoietica durante le prime fasi dello sviluppo. ER71 si lega ai motivi ETS per attivare programmi genici endoteliali, guidando processi come la vasculogenesi, la gemmazione angiogenica e le transizioni da endotelio a ematopoiesi attraverso vie che interagiscono con la segnalazione VEGF/VEGFR e con reti trascrizionali più ampie che controllano l’identità vascolare. Un’attività dis-regolata di ETV2/ER71 è stata associata a fenotipi di differenziazione endoteliale anomala e di rimodellamento vascolare, rendendolo rilevante per studi di biologia dello sviluppo, vascolarizzazione dei tessuti e angiogenesi associata ai tumori. Poiché ER71 si colloca vicino al vertice delle gerarchie trascrizionali endoteliali, perturbare ETV2 offre un punto di accesso diretto per mappare le reti geniche a valle e le decisioni di destino di linea.
ER71 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ETV2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ETV2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ETV2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ETV2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.