Eps15 Plasmide Double Nickase (h): sc-402303-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Eps15 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Eps15 Double Nickase Plasmid (h) e il Eps15 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EPS15. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Eps15 Antibody (E-3): sc-390259
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Eps15 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402303-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Eps15 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402303-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPS15 codifica per epidermal growth factor receptor substrate 15 (Eps15), un adattatore endocitico che si localizza nelle fossette rivestite di clatrina e coordina l’internalizzazione dei recettori. Eps15 interagisce con AP-2, la clatrina e partner che legano l’ubiquitina per regolare la selezione del carico, la formazione delle vescicole e le decisioni di trafficking che modellano la segnalazione a valle. Attraverso questi ruoli, EPS15 influenza il turnover dei recettori dei fattori di crescita e l’attenuazione del segnale all’interno di vie endocitiche e dipendenti dall’ubiquitina. La disregolazione dell’endocitosi e del traffico recettoriale che coinvolge EPS15 è stata studiata in contesti quali l’alterazione dei segnali proliferativi e le perturbazioni dei programmi di trasporto vescicolare rilevanti per la biologia delle malattie.
Eps15 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EPS15 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EPS15. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EPS15. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EPS15 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.