envoplakin Plasmide Double Nickase (h): sc-405420-NIC

EVPL codifica l’envoplachina, un citolinker della famiglia delle plakine che contribuisce all’involucro corneo e alle reti proteiche associate ai desmosomi negli epiteli stratificati. L’envoplachina integra i filamenti intermedi con i complessi giunzionali per sostenere la differenziazione dei cheratinociti, la formazione della barriera e la resilienza meccanica, interfacciandosi con l’organizzazione del citoscheletro e i processi di adesione cellula–cellula. Un’alterata espressione di EVPL o la perturbazione dell’assemblaggio dell’involucro sono state associate a fragilità epiteliale e a programmi di differenziazione anomali, rendendo EVPL un marcatore utile e un punto di accesso meccanicistico per lo studio dell’omeostasi di cute e mucose. In biologia del cancro, l’envoplachina e i componenti correlati dell’involucro vengono spesso esaminati nel contesto del rimodellamento epiteliale e della deregolazione dell’adesione durante la progressione tumorale.

envoplakin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EVPL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EVPL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EVPL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EVPL interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.