EHD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-407060-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EHD1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EHD1 Double Nickase Plasmid (h) e il EHD1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EHD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EHD1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407060-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EHD1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407060-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EHD1 (EH domain containing 1) codifica un’ATPasi della famiglia delle proteine EHD che regola il riciclo endocitico e il rimodellamento delle membrane, coordinando il ritorno di recettori e lipidi dagli endosomi di riciclo alla membrana plasmatica. Attraverso interazioni con fosfolipidi e adattatori endocitici, EHD1 supporta il traffico associato alla clatrina, la formazione di endosomi tubulari e programmi di riciclo recettoriale che influenzano l’intensità della segnalazione e la migrazione cellulare. Il traffico dipendente da EHD1 impatta vie legate all’assorbimento di nutrienti e al turnover dei recettori per fattori di crescita, incluse le dinamiche di riciclo del recettore della transferrina e di EGFR. Un’espressione o funzione alterata di EHD1 è stata associata in letteratura a modifiche del comportamento invasivo e a un rimodellamento dei circuiti di segnalazione in modelli di cancro, nonché a perturbazioni della polarità epiteliale e del traffico di membrana neuronale rilevanti per la neurobiologia.
EHD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EHD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EHD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EHD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EHD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.