ECM2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-436571-LAC

Il gene murino **Ecm2** codifica la proteina 2 della matrice extracellulare (ECM2), una glicoproteina secreta associata alla matrice, implicata nell’organizzazione della matrice extracellulare e nella modulazione delle interazioni cellula–matrice. ECM2 è collegata a processi quali adesione cellulare, migrazione e rimodellamento tissutale, e può influenzare vie di segnalazione dipendenti da segnali extracellulari, incluse reti mediate dalle integrine e responsivi ai fattori di crescita. Alterazioni nella composizione della matrice extracellulare e nelle dinamiche di rimodellamento sono associate a fibrosi, microambienti infiammatori e interazioni tumore–stroma, rendendo **Ecm2** rilevante per studi meccanicistici della biologia stromale e dei fenotipi regolati dalla matrice. Nei sistemi di modello murino, ECM2 rappresenta un punto di accesso pratico per analizzare come i componenti della matrice plasmino il comportamento cellulare in contesti di sviluppo e di malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale ECM2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ecm2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ECM2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ecm2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ECM2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ecm2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.