EAF1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-428881-LAC

Il gene murino **Eaf1** codifica **EAF1**, un cofattore trascrizionale nucleare inizialmente caratterizzato per la sua associazione con i fattori di allungamento della famiglia **ELL** e con il **Super Elongation Complex**, collegandolo al rilascio della pausa della RNA polimerasi II e alla trascrizione produttiva. EAF1 partecipa alla regolazione di programmi di espressione genica che influenzano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la trascrizione in risposta allo stress, e può interagire con la macchina regolatoria associata alla cromatina. La deregolazione delle vie di allungamento e di controllo trascrizionale che coinvolgono EAF1 è stata studiata nel contesto di complessi trascrizionali rilevanti per le neoplasie ematologiche e, più in generale, di modelli di “dipendenza” oncogena dalla trascrizione. Nei sistemi murini, la perturbazione di **Eaf1** è quindi utile per chiarire come il controllo dell’allungamento trascrizionale influenzi la specificazione di linea e gli stati di espressione genica associati alla malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale EAF1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Eaf1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale EAF1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Eaf1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di EAF1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Eaf1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.