DOCK 11 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406204-LAC

DOCK11 codifica per Dedicator of Cytokinesis 11, un fattore di scambio di nucleotidi guaninici (GEF) che attiva le GTPasi della famiglia Rho, in particolare CDC42, coordinando il rimodellamento del citoscheletro di actina, la polarità cellulare e la migrazione direzionale. Attraverso i domini DHR-1 e DHR-2, DOCK11 collega la segnalazione dei fosfoinositidi all’attivazione delle GTPasi, influenzando la dinamica dell’adesione, il traffico delle cellule immunitarie e gli output di segnalazione guidati dai recettori. L’alterazione dell’attività di DOCK11 è stata studiata in contesti di disfunzione della funzione leucocitaria e di controllo aberrante del citoscheletro, rendendolo rilevante per studi sulla segnalazione immunitaria, la motilità cellulare e i programmi di traffico di membrana. In quanto regolatore nodale delle vie delle piccole GTPasi, DOCK11 è spesso analizzato in studi meccanicistici che collegano l’organizzazione del citoscheletro a fenotipi dipendenti dalla segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale DOCK 11 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di DOCK11 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale DOCK 11 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione DOCK11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di DOCK 11. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo DOCK11 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.