DEPDC5 Plasmide Double Nickase (h): sc-402806-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DEPDC5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DEPDC5 Double Nickase Plasmid (h) e il DEPDC5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DEPDC5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DEPDC5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402806-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DEPDC5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402806-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DEPDC5 (DEP domain containing 5) codifica una componente centrale del complesso GATOR1, un regolatore negativo della segnalazione di mTORC1 a valle del sensing degli amminoacidi sulla superficie lisosomiale. Agendo come fattore attivante l’attività GTPasica (GAP) nei confronti delle GTPasi Rag, DEPDC5 contribuisce a limitare l’attività di mTORC1 indotta dai nutrienti, influenzando così l’autofagia, la sintesi proteica e il controllo della crescita cellulare. L’alterazione di DEPDC5 è stata associata a una segnalazione deregolata della via mTOR e a un’alterata eccitabilità neuronale, con associazioni genetiche riportate nelle epilessie focali e nelle malformazioni corticali. Queste caratteristiche rendono DEPDC5 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla regolazione di mTORC1, sul crosstalk della segnalazione metabolica e sulle alterazioni delle vie neuro-sviluppative.
DEPDC5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DEPDC5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DEPDC5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DEPDC5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DEPDC5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.