DDX3X Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401253-LAC

DDX3X codifica un’elicasi dell’RNA della famiglia DEAD-box dipendente dall’ATP, che coordina molteplici fasi del metabolismo dell’RNA, tra cui l’esportazione dell’mRNA, l’inizio della traduzione e la dinamica dei granuli di RNA durante lo stress cellulare. Attraverso interazioni con complessi ribonucleoproteici e intermedi della segnalazione, DDX3X collega la regolazione post-trascrizionale alle vie che controllano la progressione del ciclo cellulare, il rilevamento dell’immunità innata e le risposte allo stress. Un’attività alterata di DDX3X è stata associata a una compromissione dell’omeostasi dell’RNA e a una regolazione aberrante dei programmi di proliferazione e differenziamento, rendendola rilevante per studi sul neurosviluppo, sulla biologia dei fattori dell’ospite nei virus e sul rimodellamento del trascrittoma legato al cancro. Nelle cellule umane, DDX3X rappresenta un nodo chiave per analizzare come la funzione delle elicasi dell’RNA plasmi gli esiti dell’espressione genica in condizioni basali e di stress.

Le particelle di attivazione lentivirale DDX3X (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di DDX3X in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale DDX3X (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione DDX3X, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di DDX3X. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo DDX3X e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.