DcR3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404980-ACT

TNFRSF6B codifica il recettore esca 3 (DcR3), un membro solubile della superfamiglia dei recettori del TNF che si lega al ligando di Fas (FASLG), a LIGHT (TNFSF14) e a TL1A (TNFSF15) per modulare la segnalazione apoptotica estrinseca e il crosstalk infiammatorio. Sequestrando questi ligandi, DcR3 può rimodellare la segnalazione dei recettori della morte, influenzare i programmi di attivazione immunitaria collegati a NF-κB e alterare l’equilibrio tra sopravvivenza cellulare e morte cellulare programmata. L’attività di DcR3 è stata associata a evasione immunitaria, risposte dei linfociti T alterate e cambiamenti nella segnalazione del microambiente guidata dalle citochine in molteplici contesti patologici. Queste proprietà rendono TNFRSF6B un bersaglio utile per analizzare la biologia dei ligandi della famiglia TNF, la regolazione dell’apoptosi e le vie legate all’infiammazione in modelli cellulari umani.

DcR3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TNFRSF6B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DcR3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TNFRSF6B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TNFRSF6B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DcR3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TNFRSF6B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DcR3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DcR3 nelle cellule tumorali con espressione di TNFRSF6B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.