Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DBH Plasmide Double Nickase (h): sc-402441-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DBH Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DBH Double Nickase Plasmid (h) e il DBH Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DBH. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DBH Antibody (A-9): sc-365710
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DBH Plasmide Double Nickase (h) | sc-402441-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DBH Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402441-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La dopamina beta-idrossilasi (DBH) è una monoossigenasi dipendente dal rame che catalizza la conversione della dopamina in noradrenalina all’interno delle vescicole secretorie dei neuroni simpatici e delle cellule cromaffini della midollare surrenalica. Controllando l’equilibrio dopamina:noradrenalina, la DBH influenza la biosintesi delle catecolamine, la neurotrasmissione adrenergica e la segnalazione neuroendocrina responsiva allo stress. L’attività della DBH si interseca con il metabolismo della tirosina e con le vie di gestione vescicolare delle monoamine, modellando a valle la segnalazione dei recettori adrenergici e le risposte collegate ai nucleotidi ciclici. Variazioni genetiche e regolatorie della DBH sono state associate a disturbi della funzione autonomica e a fenotipi neuropsichiatrici, rendendola un bersaglio rilevante per studi meccanicistici dell’omeostasi delle catecolamine.
DBH Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DBH nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DBH. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DBH. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DBH interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.