D5DR Plasmide Double Nickase (h): sc-404047-NIC

DRD5 codifica il recettore dopaminergico D5 (D5DR), un recettore accoppiato a proteine G che si accoppia prevalentemente a Gs/olf per stimolare l’adenilato ciclasi, aumentare i livelli di cAMP e attivare la segnalazione dipendente da PKA. La segnalazione di D5DR si interseca con la trasmissione sinaptica regolata dalla dopamina, l’eccitabilità neuronale e la modulazione di vie a valle, inclusi programmi trascrizionali mediati da CREB. Nel cervello e nei tessuti periferici, DRD5 contribuisce alla regolazione della funzione dei circuiti neurali e dell’omeostasi vascolare/renale tramite la segnalazione via cAMP e il cross-talk recettoriale con altre vie di GPCR e canali ionici. La deregolazione della segnalazione dopaminergica che coinvolge DRD5 è stata indagata nel contesto di fenotipi neuropsichiatrici e della regolazione della pressione arteriosa, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla biologia delle vie della dopamina.

D5DR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DRD5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DRD5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DRD5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DRD5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.