Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400270-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- Cryopyrin/NALP3/NLRP3 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal Cryopyrin/NALP3/NLRP3 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal Cryopyrin/NALP3/NLRP3 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di NLRP3. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Antibody (6F12): sc-134306
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-400270-ACT | 20 µg | $397.00 |
NLRP3 (criopirina/NALP3) è un recettore citosolico di riconoscimento di pattern che funge da nucleo per l’inflammasoma NLRP3 in risposta a diversi segnali di stress cellulare, tra cui flussi ionici, disfunzione mitocondriale, danno lisosomiale e specie reattive dell’ossigeno. L’assemblaggio dell’inflammasoma favorisce il reclutamento di ASC e l’attivazione della caspasi-1, promuovendo la maturazione e la secrezione di IL-1β e IL-18 e consentendo la piroptosi dipendente da gasdermina D. Questo asse integra la segnalazione dell’immunità innata con vie metaboliche e di rilevamento del pericolo, plasmando l’attivazione dei leucociti, l’infiammazione tissutale e la difesa dell’ospite. Un’attività di NLRP3 deregolata è implicata nei meccanismi di malattie autoinfiammatorie e infiammatorie, rendendolo un bersaglio chiave per lo studio della regolazione dell’inflammasoma, della maturazione delle citochine e dei programmi di morte cellulare nei sistemi umani.
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NLRP3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NLRP3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NLRP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cryopyrin/NALP3/NLRP3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NLRP3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cryopyrin/NALP3/NLRP3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cryopyrin/NALP3/NLRP3 nelle cellule tumorali con espressione di NLRP3 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.