CRTAC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404534-ACT

CRTAC1 (cartilage acidic protein 1) codifica una proteina secreta associata alla matrice extracellulare, particolarmente arricchita nella cartilagine e in altri tessuti connettivi, dove contribuisce alle interazioni cellula–matrice e all’organizzazione strutturale del tessuto. CRTAC1 è stata collegata alla differenziazione dei condrociti e ai processi di omeostasi della matrice che si intersecano con le vie di adesione e di rimodellamento della matrice extracellulare. Un’alterata espressione di CRTAC1 è stata riportata in condizioni muscoloscheletriche e nelle patologie degenerative articolari, rendendola un marcatore utile per lo studio della biologia della cartilagine e del rimodellamento del tessuto connettivo. In vitro, la modulazione di CRTAC1 può supportare studi meccanicistici sulla composizione della matrice, sui fenotipi di adesione cellulare e sui programmi trascrizionali rilevanti per l’integrità della cartilagine.

CRTAC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CRTAC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CRTAC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CRTAC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CRTAC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CRTAC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CRTAC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CRTAC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CRTAC1 nelle cellule tumorali con espressione di CRTAC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.